الجديد تاتيون - قسم رقم 8 (فلم) قصة الفلم - أكسين تاريخ اكتشافه وتسميته - ليسياس - هاتف وعنوان المفروشات السعودية - ابو عريش, جازان - حرف عطف أقسام العطف - علي الطالقاني (الولادة) - هاتف وعنوان عيادة الدكتور معتز حلمي عبدالشافي -الرويس,جدة - هل المزج بين ( الديباكين مع لاميكتال) مناسب لي؟ - فينتال بخاخ موسع للشعب الهوائية ومضاد لضيق التنفس Vental Inhaler - دوال زوجية ودوال فردية الدالة الزوجية - الصفرات - هاتف وعنوان الشركة السعودية العالمية للتوكيلات والتجارة - النزهه, جدة - ايهما افضل تربية الدجاج في البطاريات ام على الارض مقارنة هامة - محمد مسلم الحسيني الإطروحات العلمية - هواتف مؤسسة حسن هادي عبدالله جوهري للتجارة والمقاولات ومعلومات عنها بالسعودية - [طب بديل ] فوائد الحبق مع الشاي والنعناع المجفف للحامل للبشرة للرجيم - مواضيع صحية - هاتف و عنوان فندق العليا هوليدي أن بالرياض و معلومات شاملة عنه - انتقال إلكتروني الانتقالات الإلكترونية الذرية - تنشئة الطفل نظريات - [بحث جاهز للطباعة] حول التسويق - - وصفة هائلة من الطب البديل لعلاج الإسهال والقيء بالاعشاب - التهاب الجلد التماسي الاعراض - يوهان هاينريش بستالوتزي حياته - طريقة طبخ المليحيه علي الطريقه العنزية بطعم لذيذ لا تفوتكم - علياء الكاظمي نبذة عنها - الأيدي الناعمة (كتاب) - هاتف وعنوان مستوصف الملحم - الجامعه, الاحساء - حارة اليهود (مسلسل) طاقم العمل - علاء الدين (حكاية) ملخص الحكاية - أنبوب دورهام - [بحث جاهز للطباعة] بحث حول علم الكيمياء , كل ما يخص الكيمياء - - ابراهيم جنان كتبه - [بحث جاهز للطباعة] طرائق التدريس - - العلاج الفعال لمرض جرثومة المعدة ونصائح طبية للمرضى - والاس وغروميت - [بحث جاهز للطباعة] بحث علمي جاهز عن الاهرامات - - عبد الملك مرتاض من مؤلفاته - هاتف وعنوان مستشفى الدكتور غسان نجيب فرعون - خميس مشيط, عسير - فترة ضوئية تأثير الفترة الضوئية على النبات - [بحث جاهز للطباعة] نموذج مقدمة بحث جامعي , نماذج بحوث جامعية - - عنوان و هواتف قنصلية السعودية فى جمهورية فرنسا ومعلومات شاملة عنها - حدأة أسود الكتفين - قمع برليز - آثار الإكستاسي على جسم الإنسان الآثار الشخصانية - صياف الحربي مولده ونشأته - هاتف وعنوان المستوصف العالمي لطب الأسنان - العزيزيه, مدينة الرياض - دولة مرادية قائمة البايات المراديين - ريتوكسيماب تاريخه - طريقة تحضير الخنفروش بطريقة سهلة - تيسير عطية عن حياته - عبد الله البلوشي (ممثل) حياته - جان دو لافونتين سيرته الذاتية - برامكة أصل البرامكة - هاتف وعنوان مستوصف الأنفال - شقراء, محافظات الرياض - داني دانييلس - هايموكس كبسولات مضاد حيوى لعلاج الالتهابات البيكتيرية Hymox Capsules - الحصبة - هاتف وعنوان مطبخ ومطعم الوادي المبارك - سلطانه, المدينة المنورة - بايت مضاعفات البايت - إبراهيم غنام حياته - ملك البحرين قائمة حكام البحرين - روني اوسيلفيان - تعرف على وصفة بيل غيتس السحرية للطامحين إلى النجاح - كبسولات الحلبة هل تؤدي نفس مفعول الحلبة أم لا؟ - تأخر الحمل هل يكون بسبب ضعف الحيوانات المنوية؟ - الفلاسفة الطبيعيون الفلسفة الطبيعية - 8 مناطق باردة في اندونيسيا هربًا من الحرارة - محفظة بومان التشريح - الخياط التجميلي بعد الولادة - خليف بن دواس وفاته - نظائر الفسفور فسفور-32 - هاتف وعنوان مستشفى المانع العام - الخبر, مدينة الخبر - لهجة شمالية (سعودية) بعض كلمات ومفردات اللهجة - وفورات الحجم تعريف - هل يصح للمرأة الحامل أن تستخدم (دراي كلور مزيل العرق) دون أن يتسبب ذلك في إيذائها؟ - الرواجيح - مكافآت طلاب مدارس تحفيظ القرآن الكريم بالمملكة العربية السعودية - عايدة أبو نوار وفاتها - جون بيير فرنان - تأثير الأدوية النفسية على العملية الجنسية - قندول من أنواع القندول - عظم غربالي أقسام العظم الغربالي - قحطان (قبيلة) قبائل قحطان - العشق الأسود (مسلسل) أهم الشخصيات - منيرة سنبل عن حياتها - دانتريلاكس كبسولات مسكن للآلام ومضاد للألتهابات Dantrelax Capsules - تركيز رأسمالي تعريف - [بحث جاهز للطباعة] قائمة بعناوين مشاريع التخرج لتخصص التربية الابتدائية - - هاتف فرع وزارة المالية بمحافظة القويعية بالسعودية - ملكاوي أصل العشيرة - 8 مناطق باردة في اندونيسيا هربًا من الحرارة - إستخراج شهادة التسلسل الدراسى بالكويت - الة المشي البشرية - خلفيات حوامل مع دعاء , صور مكتوب عليها دعاء للحامل , واتس اب ادعية للحامل - الوعلية (المفتاح) المحلات التابعة للقرية - سور القران لكل شهر من شهور الحمل - [بحث جاهز للطباعة] أجدد بحث عن كيفية كتابة تقرير ميداني - - دواء اريثرومايسين ريثينيت,اوفتالمولوزا ,ارثروميل - غابات سوريا أنواع أشجار الغابات السورية -
آخر المشاهدات نص السردي (أدب) الفرق بين الكاتب والشخصية والسارد - فيصل بن لبده نسبه - بلال بشتاوي فيلموغرافيا - ذوي منيع نسبها - سباسكولون أقراص لعلاج إضطرابات المعدة والقولون Spascolon Tablets - الدرع الكندي الامتداد الجغرافي - سندور - أحمد الصفريوي مسيرته - سيبازول فورت أقراص لعلاج الأميبا المعوية Cipazole Forte Tablets - معلومات هامة عن تحاميل هيما جل hemagel - [بحث جاهز للطباعة] مشروع تخرج محاسبة جاهزة doc , مشاريع تخرج محاسبة بكالوريوس - - الرفاعة (جبل) نبذة - غابات سوريا أنواع أشجار الغابات السورية - [بحث جاهز للطباعة] قائمة بعناوين مشاريع التخرج لتخصص العلوم - - محاولة عيش كاتب الرواية - طريقة تحضير شوربة الحلبه والحبه الحمراء (الحريروه) بالصور - هواتف مكتب الضمان الاجتماعى النسوي بالدمام ومعلومات عنها بالسعودية - خدمـات التـأشــيرات من القنصلية السعودية فى الاسكندرية - هواتف مكتب الضمان الاجتماعى بالطائف ومعلومات عنها بالسعودية - دواء بيروكسيكام لعلاج التهاب المفاصل,التهاب المفاصل الروماتويدي,النقرس - سوتالول الاستخدامات الطبية - هاتف وعنوان مطعم بابا سومى -حفر الباطن, الجبيل - وصفة هائلة من الطب البديل لعلاج الإسهال والقيء بالاعشاب - هواتف و معلومات عن جوازات منفذ الحديثة بالسعودية - هواتف مستشفى الحمنة و معلومات عنها بالمدينة المنورة بالسعودية - خشب الصندل الاحمر - هاتف وعنوان شركة الموسى - الهفوف, الاحساء - [ رقم هاتف ] المستشفى السعودي الألماني عسير - نوتان - وصفة العلاج باسماء الله الحسنى - [بحث جاهز للطباعة] بــحـــثــــ عن أمير الشعراء احمد شوقي - - صائد الأحياء (فيلم) قصة الفيلم - عبد الله صوفان القدومي مولده ونشأته - الهادي شلوف النشأة والمسيرة - فيزا عمل للسعودية ,, شروط واجراءات استخراجها - ينبعاوي أهم فنانين اللون الينبعاوي - هاتف وعنوان مطاعم بن علي - العزيزيه, مكة المكرمة - نهر غامض (فيلم) القصة - لهجة جنوبية لهجة منطقة عسير - هل يحق لي رفع دعوى رد اعتبار عن تشويه سمعه بدعوى كيديه - عنوان و هواتف قنصلية السعودية فى الإسكندرية ومعلومات شاملة عنها - الرتب الشرطية في الإمارات - سلسلة باون التفاعلية أساس النظرية - ايفرزين غسول لعلاج قمل الشعر Iverzine Lotion - هاتف مركز أبحر الشمالية الصحي بمكة المكرمة و معلومات عنه بالسعودية - عزلة المراتبة (تعز) مراجع وروابط خارجية - طريقة عمل المقلوبة الفلسطينية من الشيف مي يعقوبي - جريان الموائع معادلات حركة السوائل - قائمة أمثال حجازية أمثال الحب والكراهيه - هواتف دار الرعاية الاجتماعية بالرياض ومعلومات عنها بالسعودية - ملهم (حريملاء) - طريقة عمل كعك بالطحين - ظاهرة الثأر تعريف الثأر - عدد السعرات الحرارية في سمك الشعري والطاقة والقيمة الغذائية - فرناندو كولنج حياته الشّخصية - هاتف وعنوان مطعم البيت العربي للمندي - خميس مشيط, عسير - نعيم الشيخ - شوحط (بعدان) المحلات التابعة للقرية - هواتف مستشفى النقاهة والصحة النفسية و معلومات عنها فى منطقة بيشة بالسعودية - 5 أغذية تجنبك اليرقان وأخرى تزيده لديك - قيس بن الملوح نسبه - تشوز ليجن - هاتف و عنوان مستشفى الملك فهد بالهفوف و معلومات عنها بالسعودية - طريقة عمل أم الربيان بالفرن بطعم روعة - اشهى المأكولات البحرية - رياض شهيد حياته - السطح و الملمس في التصميم الداخلي - [بحث جاهز للطباعة] أهم بحث علمي عن اشارات المرور الضوئية - - جيهان طلعت عبد العزيز 1 النشأة - تكامل بالتجزيء استخدام التكامل بالتجزئة - قائمة المواضيع الأساسية في الاقتصاد مواضيع متعلقة - اهمية اضافة بذور حبة البركة و الشيح و الزعتر لعلائق الدواجن ودوره في تحسين الانتاج - الجامعة الملكية البريطانية (أربيل) الكليات والأقسام - هواتف شركة مطلق الغويري للمقاولات المحدودة ومعلومات عنها بالسعودية - الأسطورة والخرافة والعلاقة بينهما مقدمة عن الأساطير - شوكولاتة جلاسيه طريقة التحضير - المفتش كرومبو سحس بمب - أيهما أفضل السيبرالكس أم البروزاك للقضاء على نوبات الخوف؟ - جامعة قاردن سيتي الكليات - عبد الرحمن الربدي نبذة عن أسرتة - سور القران لكل شهر من شهور الحمل - وصفة لعلاج التبول اللاإرادي عند الأطفال بخلطات الاعشاب - وصفات تعمل بالمنزل - [بحث جاهز للطباعة] أجدد بحث علمي عن الذرة والطاقة - - تعريف النص الوصفي وما هو - هاتف وعنوان مستوصف الحسام الطبي - خميس مشيط, عسير - قبيلة الهزازي أقسام قبيلة الهزازي - مستذئبو تيارسوليو وصف - إدارة نظم المعلومات للقوات المسلحة (مصر) مهام الإدارة - فحص الاغذية عناصر الفحص - فضة قلبها أبيض (مسلسل) قصة المسلسل - الفلاسفة الطبيعيون الفلسفة الطبيعية - روكموند دنبار - سبب خروج مادة زيتية مع البراز - ريدرز دايجست - حول العالم في ثمانين يوما ملخص القصة - وصفة من الاعشاب لعلاج مرض الشرى (الارتيكاريا) - هل حبوب الياسمين وافروفيم تفيد في تكبير الثدي؟ - ابراهيم عبد الحميد ابراهيم سلامه حياته - هاتف وعنوان صيدلية هوازن - سكاكا, الجوف - هاتف وعنوان مؤسسة اياز التجارية - الطائف المركزي, الطائف - إيلكين توفيكتشي - هيستروجست كبسولات لتثبيت الحمل Hystrogest Capsules - للبيع جهاز حديث كاشف صبغ السيارات - قبيلة الشحري قبائل الشحري - بلوكاتنس أقراص لعلاج إرتفاع ضغط الدم Blokatens Tablets - كاثرين ماكنمارا عن حياتها - أفرين مزيل لإحتقان الجيوب الأنفية ولعلاج التهاب الأنف والرشح Afrin - الزبيدي النسب والتاريخ - هاتف ومعلومات عن فندق دار الرحمة بالمدينة المنورة - إريك هنري ليدل حياتة الاولى - دراسة جدوى مفصلة لمشروع صناعة المنتجات الجلدية - إدارة التعليم والتدريب المهني للقوات المسلحة (مصر) مديري الإدارة - حلقة كالفن المرحلة الأولى - تثبيت الكربون (Carbon Fixation) - يوبا الأول حياته - مسعر مبدأ عمله - عشاري أضلاع إنشاء العشاري المنتظم - الشروط المطلوب استيفائها للحصول على ترخيص نقل البضائع والمهمات بأجر بالسعودية شروط ترخيص نقل البضائع - بنتين من مصر (فيلم) ملخص الفيلم - ليفيا بريتو السيرة الذاتية - هاتف وعنوان مطاعم البيت الرومانسي - المزاحميه, محافظات الرياض - كرك نوح التسمية - قائمة العلماء المخترعين - فورين بوليسي النسخة العربية - إدارة الأزمات تعريفها - كفر شبرا زنجي السكان - رياضيات التأمين - بانشي (مسلسل) القصة - جنس شرجي الجنس الشرجي والغيرية الجنسية - هل يفيد تقويم الأسنان دون مرحلة خلع الأضراس؟ - هاتف وعنوان الرائد للأبواب الأتوماتيكية - طريق خريص, مدينة الرياض - طريقة عمل مشروب الروينه بطعم لذيذ - الة المشي البشرية - معلومات هامة عن سلالة دجاج الجميزة - رياضيات متقطعة المواضيع التي تدرسها - زينب فهمي مسيرتها - علي محمد القحطاني دواوينه - وصفات خبير الأعشاب يوسف الشرفا - مهياوة فوائد المهياوة - هدى الخطيب (ممثلة سورية) أعمالها - معركة كنزان قبل المعركة - ميرسك مولر حياته الشخصية - الاستجابه للمثيرات - نيك بوستروم مؤلفاته - عزت حرك - [بحث جاهز للطباعة] نموذج مقدمة بحث جامعي , نماذج بحوث جامعية - - مدينة صرمان الليبية - وصفة هائلة من الطب البديل لعلاج الأكزيما بالاعشاب - استديو تلفزيون أنواع الاستُديوهات - أميبريد أقراص لعلاج الهلاوس السمعية والبصرية وأعراض الفصام Amipride Tablets - هاتف وعنوان مستوصف شامخ الأهلي - الباحه - إعادة تحليل الغدة الدرقية بناء على رغبة الطبيب - جواز سفر إثيوبي شروط جواز السفر الجديد - ميزانية و تكاليف ودراسة جدوى مشروع إنتاج منتجات الألبان - جولة داخل مدينة بلفاست البريطانية بالصور - وصفة هائلة من الطب البديل لعلاج امراض القدم والارجل بالاعشاب - تشكيل تضاريس سطح الأرض عوامل نشأة التضاريس - فهد بوهندي - القلب والوتد طريقة التحضير - أنبوب جايجر-مولر وصفها وطريقة عمها - معلومات عن جل زالوكين Zalocain Gel - خلايا السيليكون الشمسية بتقنية النانو ما هي الخلية الشمسية - زلزال طبس (1978) مصدر - إيه5/1 ما هي خوارزمية التشفير المستخدمة في شبكات ال GSM؟ - الحرب على غزة 2014 الخسائر - سحر جوليا (مسلسل) ملخص القصة - طريقة تحضير خبز مبسس تونسي من الشيف منال العالم - طريقة عمل حلوة الطربوش الرائعة بطعم لذيذ - قبيلة صبح نسب قبيلة صبح - هاتف وعنوان مستوصف الكرامة الأهلي - النسيم, مدينة الرياض - وصفة هائلة من الطب البديل لعلاج الالتهاب الكيسي والأوتار بالاعشاب - هاتف وعنوان شركة رزوم لأبواب الأمان - الملز, مدينة الرياض - عبد الحكيم زعلان حياته وعمله - هاتف وعنوان مستشفى الوفاء - عنيزه, القصيم - هيرميون غرينجر صفاتها - الدباسة الجراحية .. أحدث عملية لاستئصال البواسير - راديان تعريف - هاتف وعنوان مطعم شهرزاد - جيزان, جازان - ملف شامل عن الصداع وانواعه وطرق علاجه - بشير غنيم عن حياته - وصفة هائلة من الطب البديل لعلاج فقدان شهية الطعام وفتح الشهيه للاكل بالاعشاب - قانون السعر الواحد ما هو الفرق بين تعادل القوى الشرائية وقانون السعر الواحد؟ - قاعدة زايتسيف - [بحث جاهز للطباعة] بحث علمي جاهز عن الفيزياء - - عقار سبرالكس سبب لي ضعفاً في التركيز، فكيف أتصرف؟ - فروة الرأس طبقات فروة الرأس - عروض البيت الشعري - [بحث جاهز للطباعة] بحث علمى حول مادة الرياضيات - - مصباح الإضاءة المصابيح المتوهجة - قلم ضوئي كيف يعمل القلم الضوئي - مقياس برمجي المقاييس الشائعة للبرمجيات - قائمة مدن ولاية أوهايو طالع أيضا - أبو بكر الرازي حياته ونشأته - رونالد إ. نيومان السيرة - [بحث] بطاقة قراءة لكتاب الدكتور فاروق أبوزيد بعنوان مدخل الى علم الصحافة - ملخصات وتقارير - كأس المؤسس السعودي الإعلان الرسمي لانطلاق البطولة - قماش خرساني - طريقة تحضير حشوات للفطائر من الشيف منال العالم - عبد الله الصريخ السيرة الذاتية - جدول القواسم بعض المصطلحات المتعلقة - طلائعيات تقسيم الطلائعيات - لهجة زهرانية الكلمة ومعناها باللهجه الزهرانية -
اليوم: الثلاثاء 20 اكتوبر 2020 , الساعة: 7:45 م


اعلانات

محرك البحث


تنقية البروتين الهدف

آخر تحديث منذ 2 يوم و 19 ساعة 622 مشاهدة

اعلانات
عزيزي زائر الموقع تم إعداد وإختيار هذا الموضوع تنقية البروتين الهدف فإن كان لديك ملاحظة او توجيه يمكنك مراسلتنا من خلال الخيارات الموجودة بالموضوع.. وكذلك يمكنك زيارة القسم وتصفح المواضيع المتنوعه... آخر تحديث للمعلومات بتاريخ اليوم 17/10/2020

الهدف


تنقية البروتين إما أن يكون < >تحضيرياً أو < >تحليلياً. التنقية الحضيرية تسعى إلى إنتاج كميات كبيرة نسبياً من البروتين من أجل استخدامه لاحقاً. تشمل الأمثلة تحضير المنتجات التجارية مثل الأنزيمات (مثلاً لاكتوز )، بروتينات مغذية (فصل بروتين الصويا)، وبعض المواد الصيدلية (مثلاً الأنسولين ). التنقية التحليلية والتي تنتج كمية قليلة نسبياً من البروتين لأغراض تحليلية وبحثية مختلفة، تتضمن اكتشافه وتحديد كميته ودراسة بروتين بنية البروتين بنيته البروتينية و تعديل ما بعد التحويل تعديلات ما بعد التحويل ووظيفته. أول البروتينات التي تم تنقيتها لدرجة يمكن من بلورتها هي ببسين الببسين و يورياز اليورياز . cite web جائزة نوبل في الكيمياء 1946 url http //www.nobelprize.org/nobel_prizes/ch istry/laureates/1946/ accessdate 26 كانون الثاني



shakeflask يمكن أن تنمو البكتيريا المأشوبة في دورق فيه وسط نمو.


خطوات تمهيدية



الاستخلاص


يجب وضع البروتين في محلول عن طريق تحطيم النسيج أو الخلايا الحاوية له، اعتماداً على مصدره. هناك عدة طرق لتحقيق ذلك التجميد والتذويب المتكرر و صوتنة الصوتنة و مجانسة (كيمياء) المجانسة عن طريق الضغط العالي و ترشيح الترشيح وجعله نفوذا عن طريق المذيبات العضوية. تعتمد الطريقة المختارة على هشاشة البروتين ومدى تجلّد الخلايا. عادة وفي معظم الطرق المتعارف عليها، تستخدم كروماتوغرافيا العمود لتحقيق التنقية. بعد عملية الاستخلاص هذه تصبح البروتينات الذوابة في المذيب، ويمكن فصلها عن الغشاء الخلوي و دي إن أي إلخ. عن طريق الطرد المركزي. عملية الاستخلاص تستخلص أيضاً ببتيداز الببتيداز ، والذي يبدأ بهضم البروتين في المحلول. عادة إن كان البروتين حساس للتحلل البروتيني، فمن المفضل العمل بسرعة وإبقاء المستخلص بارداً، لإبطاء التحلل البروتيني.


الترسيب والإذابة التفاضلية


يعتبر ترسيب (كيمياء) الترسيب باستخدام سلفات الأمونيوم خطوة أولى شائعة عند تنقية البروتين بكميات كبيرة. ويتم ذلك عن طريق إضافة كميات متزايدة من سلفات الأمونيوم وجمع الأجزاء المختلفة من البروتين المترسب. يمكن إزالة سلفات الأمونيوم فارز دياليز. تتعرض المجموعات الكارهة للماء من البروتينات إلى الجو وتجذب غيرها من البروتينات الكارهة للماء وتتجمع. البروتينات المترسبة ستكون كبيرة بما يكفي لرؤيتها. أحد مزايا هذه الطريقة هي إمكانية تنفيذها بكلف منخفضة على كميات كبيرة جداً.


أول البروتينات التي تذوب هي البروتينات الذوابة بالماء. تتطلب تنقية بروتين غشائي البروتين الغشائي تمزيق غشاء خلوي الغشاء الخلوي بهدف عزل بروتين محدد عن البقية الموجودة في نفس الحيز الغشائي. يمكن أحياناً عزل جزء غشائي محدد أولاً، مثل عزل ميتوكندريون الميتوكندريون عن الخلية قبل تنقية البروتين الموجود في غشاء الميتوكندريون. يمكن استخدام دوديسيل كبريتات صوديوم (SDS) كمنظف لإذابة الغشاء الخلوي والمحافظة على بروتينات الغشاء في المحلول أثناء التنقية؛ ولكن بالإمكان استخدام منظفات ألطف مثل Triton X-100 أو CHAPS للمحافظة على تكوين البروتين الأصلي خلال عملية التنقية، حيث أن SDS يسبب إفساد (كيمياء حيوية) إفساد البروتين.


الطرد المركزي الفائق


main طرد مركزي

تستخدم عملية طرد مركزي الطرد المركزي قوة الطرد المركزي لفصل مزيج من جسيمات معلقة في سائل وذات كتل أو كثافات مختلفة. عندما يدور وعاء (عادة أنبوب أو قنينة) يحوي مزيج من البروتين أو أي مادة جسيمية أخرى، كالخلايا البكتيرية، بسرعات عالية، تولد عطالة كل جسيم قوة متناسبة مع كتلتها. نزعة جسيم ما إلى الحركة في السائل بسبب هذه القوة يقابلها المقاومة التي يبديها السائل على الجسيم.



الأثر النهائي لتدوير العينة في طارد مركزي هو أن الجسيمات الثقيلة والصغيرة ذات الكثافة العالية تتحرك نحو الخارج بشكل أسرع من الجسيمات الأقل ثقلاً أو من الجشيمات التي تحتك مع السائل بشكل أكبر. عندما يدوّر معلّق من الجسيمات في طارد مركزي، قم يتشكل حزام في أسفل الوعاء غني بالجسيمات الأثقل والأقل احتكاكاً مع السائل.


تبقى الجسيمات التي لم تتجمع في السائل الطافي ويمكن إزالته من الوعاء وبذلك يفصل الحزام عن المادة الطافية. تعتمد درجة الطرد المركزي على التسارع الزاوي المطبق على العينة، والذي يقاس عادة قوة g بالقوة g . إذا تم تطبيق الطرد المركزي لفترة كافية، ستصل الجسيمات في الوعاء إلى توازن والتي تتراكم فيها الجسيمات في نقطة من الوعاء حيث تتوازن عندها كثافة الطفو مع قوة الطرد المركزي. يسمح هذا التوازن في الطرد المركزي بالتنقية المطولة للجسيم ما.


في الطرد المركزي باستخدام وسط سكروز متدرج — يتم توليد وسط متدرج من السكروز (عادة السكروز أو الغليسيرول أو وسط متدرج في الكثافة مثل بيركول ) في أنبوب بحيث تصبح التركيز الأعلى في أسفله والأدنى في أعلاه. بيركول هي علامة مسجلة مملوكة من شركات GE للعناية بالصحة. بعدها توضع طبقة من عينة البروتين في أعلى الوسط المتدرج وتدور على سرعات عالية عن طريق طرد مركزي فائق. يؤدي هذا إلى هجرة الجزيئات الثقيلة إلى أسفل الأنبوب بشكل أسرع من المواد الخفيفة. خلال الطرد المركزي دون استخدام وسط سكروز متدرج، تتعرض الجسيمات لقوة أكبر كلما بعدة أكثر عن مركز الدوران، بسبب تعرضها لقوة طرد مركزي أكبر (كلما ابتعدت، لكما تحركت أسرع). المشكلة في ذلك أنه يضيق مجال الفصل المفيد إلى مجال مرئي صغير. تدوير العينة ضعف المدة لا يعني أن الجسيمات المطلوبة ستبتعد إلى ضعف المسافة، بل ستبتعد أكثر بكثير. أما عند استخدام وسط متدرج من السكروز، فستواجه سائل متزايد الكثافة واللزوجة. سيعاكس وسط سكروز مصمم جيداً أثر تزايد قوة الطرد المركزي، بحيث تتحرك الجسيمات بشكل متناسب مع الزمن الذي تمضيه في الطرد المركزي. بعد فصل جسيمات البروتين، يجزأ الوسط ويجمع.


استراتيجيات التنقية



Size exclusion معدات كروماتوغرافيا. هنا الإعداد من أجل كروماتوغرافيا الإقصاء الحجمي. حيث يتم ضخ المصد (buffer) في العمود (على اليمين) عن طريق جهاز يتحكم به كمبيوتر.

مفتاح تصميم عملية تنقية هو اختيار مادة بادئة. عادة لا يتوزع البروتين في النبات أو الحيوان بشكل متجانس على كامل الجسم؛ حيث تملك أعضاء أو نسج مختلفة تراكيز أعلى أو أقل من البروتين. استخدام نسيج أو عضو ذو التركيز الأعلى يساهم في خفض الحجم المطلوب لإنتاج كمية محددة من البروتين المنقى. يمكن للعلماء استخدام تكنولوجيا الدنا المأشوب إن كان البروتين متوفر بشكل قليل، أو أن قيمته عالية، وذلك لتطوير خلايا تنتج كميت كبيرة من البروتين المطلوب (يعرف هذا بنظام تعبير جيني ). يسمح التعبير المأشوب بوسم البروتين، مثلا وسم بولي- هيستيدين (His-tag)، لتسهيل التنقية، ما يعني أن التنقية يمكن أن تتم بخطوات أقل. إضافة لذلك فإن التعبير المأشوب يبدأ عادة بنسبة أكبر من البروتين المطلوب مقارنة بالموجود في المصادر الطبيعية.


عادة ما تستفيد التنقية التحليلية من ثلاث خواص لفصل البروتين. الأولى، يمكن تنقية البروتين اعتماداً على نقطة التساوي الكهربي وذلك بتمريره بعمود هلام pH مدرج (pH graded gel) أو عمود تبادل أيوني. ثانياً، يمكن فصل البروتينات اعتماداً على حجمها أو كتلتها الجزيئية عن طريق كروماتوغرافيا الإقصاء الحجمي أو تحليل إس دي إس بايج (SDS-PAGE - الفصل الكهربائي لهلام كبريتات دوديكل الصوديوم متعددالأكريلامايد). عادة ما تنقى البروتينات باستخدام 2D-PAGE (الفصل الكهربائي لهلام ثنائي الأبعاد) وبعدها يحلل عن طريق بصمة كتلة الببتيد (Peptide mass fingerprinting) لإثبات هوية البروتين. وهذا مفيد جداً للأغراض العلمية إذ يكفي في هذه الأيام بعض النانو-غرامات من البروتين لتحليلها. ثالثاً، يمكن فصل البروتينات عن طريق القطبية/كراهية الماء باستخدام كروماتوغرافيا سائلة عالية الأداء أو كروماتوغرافيا الطور المعكوس .



تتضمن إجرائيات تنقية البروتين عادة خطوة كروماتوغرافية أو أكثر. الإجراء البسيط في الكروماتوغرافيا هي ضخ محلول يحوي البروتين في عمود محشو بمواد مختلفة. حيث تتأثر البروتينات المختلفة مع مواد العمود بشكل مختلف، وبذلك يمكن فصلها بالوقت اللازم للمرور بالعمود، أو الشروط المطلوبة لاستخلاص البروتين من العمود. عادة ما يكشف عن البروتينات أثناء خروجها من العمود بامتصاصها عند 280 نانو-متر. ويوجد عدة طرق كروماتوغرافية مختلفة


كروماتوغرافيا الإقصاء الحجمي



main استشراب عبور الهلام

يمكن استخدام كروموتوغرافيا الكروموتوغرافيا لفصل بروتين في محلول أو إفساد (كيمياء حيوية) ظروف افساد باستخدام هلام مسامي. تعرف هذه التقنية بكروموتوغرافيا الإقصاء الحجمي. مبدأها أن الجزيئات الأصغر عليها أن تعبر حجماً أكبر في النسيج المسامي. لذا ستحتاج البروتينات ذات القياسات المختلفة إلى كمية مختلفة من الشاطِف (المذيب) قبل أن تصل إلى الطرف الآخر من عمود الهلام وتجمع من هناك.


عند الحديث عن تنقية البروتينات، فعادة ما يجمّع الشاطف في أنابيب اختبار مختلفة. ويتم إهمال كل أنابيب الاختبار التي لا يوجد فيها أثر قابل للقياس من البروتين المطلوب. المحلول المتبقي يحوي البروتين المطلوب تنقيته، إضافة إلى بروتينات أخرى ذات حجم مشابه.


الفصل اعتماداً على الشحنة أو كراهية الماء



كروماتوغرافيا التفاعل الكاره للماء



يحوي وسط < >كروموتوغرافيا التفاعل الكاره للماء (HIC) أجزاء كارهة وأجزاء محبة للماء معاً (amphiphilic)، مما يسمح بفصل البروتينات اعتماداً على كرهها السطحي للماء. التفاعلات بين الراتنج والأجزاء الكارهة للماء من البروتين تكون ضعيفة جداً، لكن يتم تحسين هذا التفاعل بوضع عينة البروتين في وسط HIC راتنجي في صاد (buffer) ذو قوة أيونية كبيرة. بعدها يتم تخفيف القوة الأيونية للصاد من أجل تخفيف الكراهية للماء لاستخراج البروتينات. cite journal last Kennedy first RM Hydrophobic chromatography. journal Methods in enzymology year 1990 volume 182 pages 339–43 pmid 2314246



كروماتوغرافيا التبادل الأيوني


main كروماتوغرافيا التبادل الأيوني

تفصل كروماتوغرافيا التبادل الأيوني المكونات اعتماداً طبيعة وردجة شحنتها الأيونية. يتم اختيار العمود الذي سيستخدم اعتماداً على نوع وقوة الشحنة. تملك راتنجات التبادل الأنيوني شحنة موجبة وتستخدم لإبقاء وفصل المركبات المشحونة سلبياً، في حين تملك راتنجات التبادل الكاتيوني شحنة سالبة وتستخدم في فصل الجزيئات المشحونة إيجابياً.


قبل بدء الفصل يتم ضخ الصاد (buffer) عبر العمود لموازنة الأيونات المشحونة عكسياً. عند حقن العينة تتبادل الجزيئات الذائبة مع أيونات الصاد حيث أن كل منها يتنافس على أماكن الارتباط في الراتنج. مدة إبقاء كل محلول يعتمد على قوة شحنته. ستستخلص المكونات المشحونة بشكل ضعيف أولاً، يتبعها تلك المشحونة بشكل أكبر. وبسبب طبيعة آلية الفصل هذه، تلعب كل من درجة الحرارة وتركيز الصاد ونوعه و درجة pH أدواراً مهمة في التحكم بالفصل.


إن كروماتوغرافيا التبادل الأيوني أداة قوية جداً تستخدم في تنقية البروتين وتستخدم عادة في كل من الفصل التحضيري والتحليلي.


Metal-affinity column عمود انجذابي نيكل للنيكل . الراتنج أزرق بسبب وجود النيكل.

كروماتوغرافيا انجذابية


main كروماتوغرافيا انجذابية

إن الكروماتوغرافيا الانجذابية هي تقنية فصل اعتماداً على التعديل الجزيئي، والذي كثيراً ما يستخدم راتنجات حسب التطبيق. تملك هذه الراتنجات ربيطة ربائط (ligands) موجودة على سطحها وخاصة بالمركب المراد فصله. غالباً ما تعمل بطريقة مشابهة لتفاعلات جسم مضاد-مستضد. يناسب هذا المفتاح والقفل بين الربيطة والهدف مما يجعلها خصوصيتها بالارتباط بالمركب المطلوب عالية، وعادة ما تكون على شكل قمة واحدة، في حيث لا يتم تخزين كل شيء متبقي في العينة.


العديد من الأغشية البروتينية هي بروتين سكري ويمكن تنقيتها بكروماتوغرافيا إنجذابية للليكتين (lectin). يمسح للبروتينات المنحلة في المنظف بالارتباط بالراتنج الكروماتوغرافي الذي تم تعديله ليملك ليكتين مرتبط تشاركياً. في حين تغسل البروتينات التي لم ترتبط بالليكتين ثم يتم استخلاص البروتينات السكرية المرتبطة بإضافة تركيز عالي من سكر ينافس البروتينات السكرية المرتبطة في موقع ارتباط الليكتين. تملك بعض الليكتينات انجذابية عالية للسكريات قليلة التعدد (oligosaccharides) للبروتينات السكرية مما يجعل من الصعب تنافسها مع السكريات، ويجب تحرير البروتينات السكرية المرتبطة عن طريق إفساد الليكتين.


الارتباط بمعدن


Protein Purification MetalBinding.tif 310x310 مخطط يوضح خطوات استراتيجية الارتباط بمعدن ما أجل تنقية البروتين.

main وسم بولي هيستيدين

تتضمن التقنية الشائعة هندسة سلسلة من 6 إلى 8 هيستيدينات (histidines) إلى البوابة N- أو C- من البروتين. يرتبط البولي-هيستيدين بقوة مع أيونات المعادن ثنائية التكافؤ كالنيكل والكوبالت. يمكن تمرير البروتين خلال عمود يحوي أيونات نيكل غير متحركة والتي ترتبط بوسم البولي-هيستيدين. تمر كل البروتينات غير الموسومة خلال العمود. يمكن استخلاص البروتين باستخدام إِيميدازول الإِيميدازول ، والذي ينافس وسم البولي-هيستيدين بالارتباط بالعمود، أو عن طريق إنقاص pH (عادة إلى 4.5)، مما يقلل من إنجذابية الوسم للراتنج. تستخدم هذه الإجرائية لتنقية البروتينات المأشوبة مع وسم انجذاب مُهندَس (مثل 6xHis أو Clontech's HAT)، كما يمكن أن تستخدم للبروتينات الطبيعية ذات الإنجذاب الطبيعي إلى الكاتيونات ثنائية التكافؤ.


كروماتوغرافيا الإنجذاب المناعي


hplc جهاز HPLC. من اليسار لليمين جهاز ضخ يولد تدرجاً من مذيبين مختلفين، وعمود مدعم بالفولاذ، وجهاز لقياس الامتصاص.

main كروماتوغرافيا الإنجذاب المناعي


تستخدم كروماتوغرافيا الإنجذاب المناعي الارتباط النوعي للجسم المضاد مع البروتين الهدف لتنقية البروتين بشكل انتقائي. يتضمن الإجراء تثبيت الجسم المضاد في مادة العمود، والتي ترتبط فيما بعد بالبروتين بانتقائية، فيما يمر كلما تبقى خلال العمود. يمكن استخلاص البروتين عن طريق تغيير درجة pH أو الملوحة. يمكن استخدام هذه الطريقة مع البروتينات من المصادر الطبيعية لأنها لا تتضمن هندسة وسم. cite journal author Ehle H, Horn A Immunoaffinity chromatography of enzymes journal Bioseparation volume 1 issue 2 pages 97–110 year 1990 pmid 1368167

فصل بروتين موسوم


طريقة أخرى في فصل البروتين تقوم على هندسة وسم ببتيد مستضد هلى البروتين، ثم تنقية البروتين على عمود أو عن طريق حضن راتنج مهلهل مغطى بمادة مستضدة غير متحركة/ثابتة. يعرف هذا الإجراء ترسيب مناعي بالترسيب المناعي . يمكن للترسيب المناعي توليد تفاعل انتقائي جداً والذي عادة ما ينتج البروتين المطلوب فقط. بعدها يمكن بسهولة فقل البروتينات الموسومة والمنقاة عن البروتينات الأخرى في المحلول واستخراجها مرة أخرى في محلول نظيف.


عندما لا نعود بحاجة للوسوم، يمكن التخلص منها عن طريق ببتيداز. وهذا عادة ما يتضمن هندسة مكان إزالة الببتيداز بين الوسم والبروتين.


كروماتوغرافيا سائلة عالية الأداء


main كروماتوغرافيا سائلة عالية الأداء

الكروماتوغرافيا السائلة عالية الأداء أو الكروماتو غرافيا السائلة عالية الضغط هي نوع من الكروماتوغرافيا الذي يطبق ضغط عالي لدفع المحاليل خلال العمود بشكل أسرع. مما يعني اختصار الإنتشار وتحسيد الدقة. أكثر الأنواع شيوعاً هو الطور المعكوس ، حيث تكون مادة العمود كارهة للماء. يتم استخراج البروتينات عن طريق تدرج من كميات متزايدة من مذيب عضوي، مثل الأسيتونتريل. يستخلص هذا البروتينات حسب كراهيتها للماء. بعد التنقية باستخدام HPLC يصبح البروتين في محلول يحوي فقط على مركبات تطايرية، يمكن تجفيدها بسهولة. cite journal author Regnier FE High-performance liquid chromatography of biopolymers journal Science volume 222 issue 4621 pages 245–52 date October 1983 pmid 6353575 url http //www.scienc ag.org/cgi/pmidlookup?view long&pmid 6353575 doi 10.1126/science.6353575 تؤدي التنقية باستخدام HPLC إلى إفساد البروتينات المنقاة وذلا فلا يمكن تطبيقها إن على البروتينات التي لا تنطوي مجدداً بشكل تلقائي.



تركيز البروتين المنقى


ultra filtration يمكن تثبيت غشاء نفوذ بشكل انتقائي في أنبوب طرد مركزي. فتجبر المادة الصادة buffer على الخروج من الغشاء بسبب الطرد المركزي، تاركاً البروتين في الغرفة العلوية.

غالباً يجب تركيز البروتين، بعد انتهاء عملية التنقية. وهناك عدة طرق للقيام بذلك.


التجفيد


يمكن تجفيد (تجفيف) المحلول إن لم يكن يحوي على أي مكونات ذائبة غير البروتين المطلوب. يتم هذا عادة بعد استخدام HPLC. مما يؤدي إلى تطاير المواد الطيارة، تاركة البروتين خلفها.


الترشيح الفائق


وذلك بترشيح المحلول البروتيني باستخدام أغشية نفوذة بشكل انتقائي. وظيفة الغشاء هو السماح للماء والجزيئات الصغيرة بالعبور وإبقاء البروتين. يتم ضغط المحلول عبر الغشاء باستخدام مضخة ميكانيكية، أو ضغط هواء، أو طرد مركزي.


تقدير ناتج التنقية


أبسط طريقة عامة لمراقبة عملية التنقية هي عن طريق إس دي إس بايج (SDS-PAGE - الفصل الكهربائي لهلام كبريتات دوديكل الصوديوم متعددالأكريلامايد) من بين الخطوات المختلفة. تعطي هذه الطريقة قياساً تقريبياً لكميات البروتينات المختلفة في المزيج، ولا يمكنها التفريق بين البروتينات التي تملك نفس كتلة جزيئية الوزن الجزيئي الظاهر.


إن كان للبروتين خواص مطيافية طيفية مميزة أو نشاط إنزيم أنزيمي ، يمكن استخدام هذه الخاصة لكشف وحساب كمية بروتين محدد، وأيضاً لانتقاء أجزاء الفصل التي تحوي البروتين. إن توافرت أجسام مضادة للبروتين فيمكن عندها استخدام لطخة ويسترن أو إليزا (المقايسة المناعية المرتبط بالإنزيم) أليزا لكشف وحساب كمية البروتين المطلوب. تعمل بعض البروتينات مستقبل (كيمياء حيوية) كمستقبلات ويمكن الكشف عنها أثناء التنقية عن طريق فحص ربيطة ارتباط الربيطة ، عادة عن طريق ربيطة مشعة (radioactive ligand).


بغرض تقييم عملية التنقية متعددة الخطوات، يجب مقارنة كمية البروتين المطلوب مع الكمية الكلية من البروتين. والتي يمكن تحديدها عن طريق فحص برادفورد للبروتين أو عن طريق امتصاص الضوء عند 280 نانو-متر. لكن قد تؤثر بعض المركبات المستخدمة أثناء التنقية على حساب الكمية. كمثال، فإن إيميدازول (المستخدم عادة لتنقية البروتينات المأشوبة والموسومة باستخدام بولي-هيستيدين) هو نظير لحمض أميني وفي التراكيز الخفيفة سيؤثر على فحص حمض بيسنكروننيك (bicinchoninic acid - BCA) لقياس كمية البروتين الكلية. شوائب الإيميدازول ذو الجودة المنخفضة ستمتص أيضاً عند 280 نانو-متر، مما يؤدي إلى قراءة غير دقيقة لتركيز البروتين من امتصاص الأشعة فوق البنفسجية.


من الطرق الأخرى المعتبرة هي رنين سطح البلاسمون (Surface Plasmon Resonance - SPR) ويمكن لهذه الطريقة الكشف عن الجزيئات غير الموسومة على سطح شريحة. إن كان البروتين المطلوب هو جسم مضاد، فسيتحول الارتباط مباشرة إلى نشاط للبروتين. يمكن عندها التعبير عن تركيز البروتين النشط كنسبة من البروتين الكلي. وهذه الطريقة قوية وسريعة لتحديد نشاط البروتين والناتج الكلي. وهي تقنية قوية تحتاج إلى معدات للقيام بها.


تحليلي



فصل كهربي في ظروف إفساد


فصل كهربائي للهلام الفصل الكهربائي للهلام هو تقنية مخبرية شائعة يمكن استخدامها بالطرق التحليلية والتحضيرية معاً. يقوم مبدأ الفصل على تحرك الأيونات المشحونة في حقل كهربائي. عملياً، يتم إفساد البروتينات في محلول يحوي منظف ( دوديسيل كبريتات صوديوم ). وفي هذه الظروف، تنفرد البروتينات وتغطى بجزيئات المنظف المشحونة سلبياً. يتم فصل البروتينا في إس دي إس بايج اعتماداً فقط على حجمها.


في الطرق التحليلية، يرحل البروتين على شكل حلقات اعتماداً على حجمه. كل حقلة يمكن الكشف عنها باستعمال صبغة مثل صبغة كوماسي الزرقاء (Coomassie Brilliant Blue) أو الصبغة الفضية. تتطلب الطرق التحضيرية المستخدمة في تحضير كميات كبيرة من البروتين استخلاص البروتين من هلام الفصل الكهربائي. قد تتضمن عملية الاستخلاص هذه استئصال الجل الحاوي على حلقة، أو استخلاص الحلقة مباشرة عند خروجها من الهلام.


في سياق استراتيجيات التنقية، فإن الفصل الكهربائي بظروف إفساد يوفر دقة أفضل من كروماتوغرافيا الإقصاء الحجمي، لكن لا يمكن توسيعها لتشمل كميات كبيرة من البروتين في العينة كما في كروماتوغرافيا العمود.


فصل كهربي دون ظروف إفساد


من إجراءات الفصل الكهربي الهمة والذي يتم دون ظروف إفساد بهدف فصل البروتينات المعدنية النشطة حيوياً (bioactive metalloproteins) في خلائط بروتينية معقدة وتدعى 'الفصل الكهربائي المستمر الأصلي التحضيري الكمي لهلام متعددالأكريلامايد' إنج quantitative preparative native continuous polyacrylamide gel electrophoresis - QPNC-PAGE .


تنقية البروتين هو عبارة عن سلسلة من العمليات تهدف إلى عزل نوع واحد أو عدة أنواع من البروتين من خليط معقد، عادة الخلايا أو الأنسجة أو أعضاء كاملة. تنقية البروتين أمر حيوي جدا لتوصيف الهيكلية والوظيفة والتفاعلات بين البروتينات المراد فحصها أو دراستها. تفصل عملية التنقية الأجزاء البروتينية عن غير البروتينية، ثم تفصل البروتين المطلوب عن بقية البروتينات. وعادة ما يكون فصل البروتين المطلوب عن باقي البروتينات هو الوجه الأصعب في تنقية البروتينات. وتستغل خطوات الفصل عادة الفروق في حجم البروتين، وخواصه الفيزيائية الكيميائية وميلها للارتباط ونشاطها الحيوي.



يمكن تقسيم طرق تنقية البروتينات إلى طرق تحليلية وطرق تحضيرية. والفارق بينها ليس دقيقاً، لكن العامل المحدد هو كمية البروتين التي يمكن تنقيتها بتلك الطريقة. الطرق التحليلية تسعى إلى اكتشاف البروتين والتعرف عليه في مزيج، في حين تسعى الطرق التحضيرية إلى إنتاج كميات كبيرة من البروتين لأغراض أخرى، كالاستخدام الصناعي و علم الأحياء البنيوي ، ويمكن استخدام الطرق التحضيرية في التطبيقات التحليلية، ولكن ليس العكس.
شاركنا رأيك

 
اعلانات
التعليقات

لم يعلق احد حتى الآن .. كن اول من يعلق بالضغط هنا

أقسام الموقع المتنوعة أوجدت لخدمة الزائر ليسهل عليه تصفح الموقع بسلاسة وأخذ المعلومات تصفح هذا الموضوع تنقية البروتين الهدف ويمكنك مراسلتنا في حال الملاحظات او التعديل او الإضافة او طلب حذف الموضوع ...آخر تعديل اليوم 17/10/2020



الاكثر مشاهدة في شبكة طريق 95
الأكثر مشاهدة خلال 24 ساعة
الأكثر قراءة
الموضوعات الاكثر بحث علي مدار الساعة
الموضوعات الاكثر مناقشة
الاكثر مناقشه بالقرب مني